Nová sada pro detekci nukleových kyselin koronaviru (SARS-Cov-2).
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flurudascent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Nová sada pro detekci nukleových kyselin Coronavirus (SARS-Cov-2) (Metoda fluorescenční sondy RT-PCR)
【Packaging specifications 】25 testů/sada
【Intended usstáří】
Tato souprava se používá pro kvalitativní detekci nukleové kyseliny z nového koronaviru ve výtěrech z nosohltanu, orofaryngeálních (krčních) výtěrech, předních nosních výtěrech, výtěrech středních turbinátů, nosních výplachech a nosních aspirátech od jedinců, u kterých je jejich poskytovatel zdravotní péče podezřelý z COVID19. Detekci ORF1ab a N genů nového koronaviru lze využít pro pomocnou diagnostiku a epidemiologický monitoring nové koronavirové infekce.
【Principles of the procedure 】
Tato sada je navržena pro specifické sondy TaqMan a specifické primery navržené pro nové sekvence genu ORF1ab a N koronaviru (SARS-Cov-2). PCR reakční roztok obsahuje 3 sady specifických primerů a fluorescenčních sond pro specifickou detekci cílů a další sada specifických primerů a fluorescenčních sond se používá jako vnitřní standardní kontrola soupravy pro detekci endogenních housekeeping genů.
Princip testu spočívá v tom, že specifická fluorescenční sonda je štěpena a degradována exonukleázovou aktivitou enzymu Taq v PCR reakci, takže reportérová fluorescenční skupina a zhášená fluorescenční skupina jsou odděleny, takže fluorescenční monitorovací systém může přijímat fluorescenční a poté prostřednictvím obohacovacího účinku PCR amplifikace dosáhne fluorescenční signál sondy nastavené prahové hodnoty-hodnoty Ct (prah cyklu). V případě žádného cílového amplikonu je reportérová skupina sondy blízko zhášecí skupině. V tomto okamžiku dochází k přenosu fluorescenční rezonanční energie a fluorescence reportérové skupiny je zhášena zhášecí skupinou, takže fluorescenční signál nemůže být detekován fluorescenčním PCR přístrojem.
Aby bylo možné sledovat použití činidel během testu, je souprava vybavena pozitivními a negativními kontrolami: pozitivní kontrola obsahuje rekombinantní plazmid v cílovém místě a negativní kontrola je destilovaná voda, která se používá k monitorování znečištění životního prostředí. Při testování se doporučuje nastavit současně pozitivní a negativní kontrolu.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Componentů | |
| Náme | Specověření | Kvantity | Kvantity | |
| Pozitivní kontrola | 180 μl/lahvička | 1 | 1 | Uměle konstruované plazmidy, destilovaná voda |
| Negativní kontrola | 180 μl/lahvička | 1 | 1 | Destilovaná voda |
| Směs SARS-Cov-2 | 358,5 μl/lahvičku | 1 | / | Specifické páry primerů, specifické detekční fluorescenční sondy, dNTP, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilovaná voda atd. |
| Směs enzymů | 16,5 μl/lahvička | 1 | / | Taq enzymy, reverzní transkriptáza, enzymy UNG atd. |
| SARS-Cov-2 Mix (lyofilizovaný) | 25 testů/lahvička | / | 1 | Specifické páry primerů, specifické detekční fluorescenční sondy, dNTP, Taq enzymy, reverzní transkriptáza, destilovaná voda atd. |
| 2x Buffer | 375 μl/lahvička | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilovaná voda atd. |
Poznámka：(1) Komponenty v různých dávkových sadách nelze míchat ani zaměňovat.
(2) Připravte si vlastní činidlo: Souprava pro extrakci nukleových kyselin.
【Storage conditions a expiration date 】
For BST-SARS-25:Přepravujte a skladujte při -20±5 °C po dlouhou dobu.
For BST-SARS-DR-25:Transportujte při pokojové teplotě. Skladujte při -20±5 °C po dlouhou dobu.
Vyhněte se opakovaným cyklům zmrazování a rozmrazování. Doba platnosti je předběžně stanovena na 12 měsíců.
Datum výroby a použití najdete na štítku.
Po prvním otevření může být činidlo skladováno při teplotě -20±5 °C po dobu ne delší než 1 měsíc nebo do konce období činidla, podle toho, které datum nastane dříve, aby se zabránilo opakovaným cyklům zmrazování a rozmrazování a počtu zmrazování činidla. - cykly rozmrazování by neměly přesáhnout 6krát.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.Použitelný typ vzorku: Roztok extrahované nukleové kyseliny.
2. Skladování a přeprava vzorků: Skladujte při -20±5 °C po dobu 6 měsíců. Vzorky zmrazte a rozmrazte maximálně 6krát.
【Todhading method】
1.Nucleic acid extraction
Vyberte vhodnou sadu pro extrakci nukleové kyseliny pro extrakci virové nukleové kyseliny a postupujte podle příslušných pokynů sady. Doporučuje se použít sadu pro extrakci a purifikaci nukleových kyselin od společnosti Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. nebo ekvivalentní sadu pro purifikaci nukleových kyselin.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Odstraňte směs SARS-Cov-2 a směs enzymů, úplně roztavte při pokojové teplotě, důkladně promíchejte pomocí zařízení Vortex a poté krátce odstřeďte.
(2) 16,5 ul směsi enzymů bylo přidáno k 358,5 ul směsi SARS-Cov-2 a důkladně promícháno, aby se získal směsný reakční roztok.
(3) Připravte si čistou 0,2 ml PCR osmičkovou zkumavku a označte ji 15 ul výše smíchaného reakčního roztoku na jamku.
(4) Přidejte 15 μl purifikovaného roztoku nukleové kyseliny, pozitivní kontrolu a negativní kontrolu a opatrně zakryjte uzávěr zkumavky.
(5) Dobře promíchejte obrácením dnem vzhůru a rychle odstřeďte, aby se kapalina koncentrovala na dně zkumavky.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Přidejte 375 ul 2x pufru do směsi SARS-Cov-2 ((lyofilizované) pro přípravu reakční směsi. Důkladně promíchejte pipetováním a poté krátce odstřeďte. (Jakmile je reakční směs připravena, doporučujeme skladovat při teplotě -20 °C dlouhodobé skladování).
(2) Připravte si čistou oktální zkumavku 0,2 ml PCR a označte ji 15 μl reakční směsi na jamku.
(3) Přidejte 15 μl purifikovaného roztoku nukleové kyseliny, pozitivní kontrolu a negativní kontrolu a opatrně zakryjte uzávěr zkumavky.
(4) Dobře promíchejte obrácením dnem vzhůru a rychle odstřeďte, aby se kapalina koncentrovala na dně zkumavky.
3. PCR amplification (Provozní nastavení naleznete v návodu k přístroji.）
3. 1 Umístěte 8-zkumavku PCR do vzorkové komory fluorescenčního PCR přístroje a nastavte testovaný vzorek, pozitivní kontrolu a negativní kontrolu podle pořadí plnění.
3.2 Fluorescenční detekční kanál:
(1) Gen ORF1ab vybírá detekční kanál FAM (Reportér: FAM, Quencher: Žádný).
(2) N gen vybírá detekční kanál VIC (Reportér: VIC, Quencher: Žádný).
(3) Gen vnitřního standardu vybírá detekční kanál CY5 (Reportér: CY5, zhášeč: Žádný).
(4) Pasivní reference je nastavena na ROX.
3.3 Nastavení parametrů programu PCR:
| Krok | Teplota (℃) | Čas | Počet cyklů | |
| 1 | Reverzní transkripční reakce | 50 | 15 min | 1 |
| 2 | Aktivace enzymu Taq | 95 | 2,5 min | 1 |
| 3 | Aktivace enzymu Taq | 93 | 10 s | 43 |
| Extenze žíhání a získávání fluorescence | 55 | 30 s | ||
Po nastavení uložte soubor a spusťte reakční program..
4.Results analysis
Po skončení programu se výsledky automaticky uloží a analyzuje se amplifikační křivka. Křivka amplifikace je nastavena na výchozí práh přístroje.
【Explanation of test results 】
1. Určete platnost experimentu: Pozitivní kontrola FAM, kanál VIC by měl mít typickou amplifikační křivku a hodnota Ct je obecně menší než 34, ale může kolísat kvůli různým nastavením prahů různých přístrojů. Kanál negativní kontroly FAM, VIC by měl být neamplifikované Ct. Je dohodnuto, že výše uvedené požadavky musí být splněny současně, jinak je tento test neplatný.
2. Výsledek rozsudku
| kanál FAM/VIC | Výsledek rozsudku |
| Ct 37 | Vzorový test je pozitivní |
| 37≤Ct＜40 | Amplifikační křivka má tvar S a podezřelé vzorky je třeba znovu prozkoumat; pokud jsou výsledky opakovaného vyšetření shodné, hodnotí se jako pozitivní, v opačném případě je negativní |
| Ct≥40 nebo žádné zesílení | Test vzorku je negativní (nebo pod spodní hranicí detekce soupravy) |
Poznámka: (1) Pokud jsou oba kanály FAM a VIC současně kladné, je SARS-Cov-2 považováno za kladné.
(2) Pokud je kanál FAM nebo kanál VIC pozitivní a druhý kanál negativní, test by se měl opakovat. Pokud je současně pozitivní, bude posouzen jako SARS-Cov-2 pozitivní, jinak bude posouzen jako SARS-Cov-2 negativní.
Související produkty
-
Sada pro detekci protilátek COVID-19 IgM/IgG
Detekční souprava protilátek COVID-19 IgM/IgG (Metoda imunochromatografie s koloidním zlatem) Návod k produktu 【NÁZEV PRODUKTU】 Detekční souprava protilátek COVID-19 IgM/IgG (Testovací metoda imunochromatografie na koloidní zlato) 【BALENÍ】SPECIFIKACE BALENÍ】1 SPECIFIKACE BALENÍ】 ABSTRAKT】 Nové koronaviry patří do rodu β. COVID-19 je akutní respirační infekční onemocnění. Lidé jsou obecně náchylní. V současné době jsou hlavním zdrojem...
-
Souprava pro extrakci nebo čištění nukleových kyselin
Souprava pro extrakci nebo purifikaci nukleových kyselin nebo skladovaná při -20 °C. Vzorek by měl být přepravován pomocí zvlnění 0 °C. Úvod Souprava pro extrakci nebo purifikaci nukleových kyselin (metoda magnetických kuliček) je navržena pro automatickou purifikaci RNA a DNA z tělesných tekutin (jako jsou výtěry, plazma, sérum) pomocí automatických nástrojů pro extrakci nukleových kyselin. Technologie magnetických částic poskytuje vysoce kvalitní DNA/RNA, která je vhodná pro...
-
Sada SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit （Imunochromatogr...
SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit (Imunochromatografická metoda) Manuál k produktu 【NÁZEV PRODUKTU】 SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit (Imunochromatografická metoda) 【SPECIFIKACE BALENÍ】 1 Test/Kit 〲Abstraktní gen 【Kompletní virusβ. COVID-19 je akutní respirační infekční onemocnění. Lidé jsou obecně náchylní. V současnosti jsou pacienti nakažení novým koronavirem hlavní...
-
Sada pro stanovení antigenu SARS-CoV-2
SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit (Imunochromatografická metoda) Manuál k produktu 【NÁZEV PRODUKTU】 SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit (Imunochromatografická metoda) 【SPECIFIKACE BALENÍ】 1 test/souprava】 25 testů/sada AB10CT, sada nové koronaviry patří do rodu β. COVID-19 je akutní respirační infekční onemocnění. Lidé jsou obecně náchylní. V současné době jsou hlavním zdrojem infekce pacienti infikovaní novým koronavirem; asymptomaticky nakažení lidé...